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大乐透预期号码:血管性血友病因子和胎盤生長因子檢測在AMI中的臨床意義

發布日期:2019-01-30 瀏覽次數[] 文章來源:網上收集

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                  作者:桑圣剛, 榮紅,覃西,錢士勻

【摘要】   目的:觀察急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)患者循環內皮細胞(CEC)核DNA改變的特點,檢測血漿中血管性血友病因子(Von Willebrand factor, vWF)、胎盤生長因子(Placental growth factor,PLGF)的含量變化,探討其臨床意義。方法:應用單細胞凝膠電泳技術(SCGE)檢測102例AMI患者(AMI組)和75例健康人(對照組)CEC核 DNA的損傷;以酶聯免疫吸附實驗法(ELISA)進一步檢測兩組vWF、PLGF的含量。結果:SCGE顯示:AMI組患者(93.72±6.75)% CEC核 DNA電泳呈明顯的“彗星”狀,其彗尾DNA含量為(42.22±1.56)%;對照組(10.24±4.33)蜟核DNA表現為“彗星”狀,其彗尾DNA含量為(6.31±2.41)%。AMI組與對照組彗星率、彗尾DNA含量比較差異均有顯著性意義(P均<0.001)。AMI組vWF、PLGF的含量顯著高于對照組(P<0.01)。結論:AMI組患者血管內皮細胞明顯損傷;血漿中vWF、PLGF的含量明顯升高,早期檢測血漿vWF、PLGF的含量可能有利于AMI的治療,甚至可以起到預防作用。

【關鍵詞】  心肌梗死;循環內皮細胞;血管性血友病因子;胎盤生長因子;損傷

 ?。跘BSTRACT] Objective: To observe the alteration of nuclear DNA of circulating endothelial cells, and changes of plasma Von Willebrand factor (vWF) and placental growth factor (PLGF) concentrations in patients with acute myocardial infarction in order to explore its clinical significance. Methods: The damage of nuclear DNA in circulating endothelial cells was assayed by single cell gel electrophoresis (SCGE); concentrations of vWF and PLGF were detected by ELISA in 102 patients with acute myocardial infarction (AMI group) and 75 healthy people (control group). Results: In the AMI group, (93.72%±6.75) % nuclear DNA in circulating endothelial cells were shown as comet and the DNA content in the tail was (42.22%±1.56) %, significant higher than (10.24±4.33)% and (6.31±2.41) % ( both P<0.05) of the control group.  The concentrations of vWF and PLGF were also both significantly higher than that of the control group (P<0.01). Conclusions: In patients with AMI, the vascular endothelial cells are significantly damaged; the contents of vWF and PLGF were significantly increased, thus early detection of plasma vWF and PLGF levels may contribute to the treatment and prevention of AMI.
   
 ?。跭EY WORDS] Acute myocardial infarction; Circulating endothelial cell; Von Willebrand factor; Placental growth factor; Damage

  急性心肌梗死(AMI)是嚴重危害人類健康的疾病,其病理、生理基礎是不穩定冠狀血管粥樣硬化斑塊在某些誘因的作用下首先引起內皮細胞損傷,隨著人民生活水平的提高和人口老齡化,AMI的發病率呈上升趨勢,對人類的健康及生命已構成嚴重威脅。大量實驗證明血管內皮細胞(vascular endothelial cell,VEC)損傷是心血管疾病發生的始動因素[1],從VEC著手探討心血管疾病的原因、預防及其治療愈來愈多的受到了國內、外學者的關注。本文從AMI患者外周提取循環內皮細胞(CEC)進行研究,探討CEC核DNA的改變情況,同時檢測AMI患者血漿中血管性血友病因子(vWF)、胎盤生長因子(PLGF)的含量,探討AMI患者VEC損傷的原因,為AMI的治療、預防提供新的理論依據。

  1  材料與方法

  1.1  病例選擇
   
  選取2007年9月~2010年3月海南醫學院附屬醫院和海南省人民醫院心內科確診的AMI患者102例,其中男性59例,女性43例,平均年齡(52.6±4.5)歲,全部符合臨床診斷標準[2]。同期選擇海南醫學院附屬醫院綠卡中心健康體檢者75例為對照組,其中男性47例,女性28例,平均年齡(50.4±5.3)歲。AMI組和對照組均無呼吸系統疾病、肝病、腦血管疾病、高血壓、高脂血癥、腎病、糖尿病及其他自身免疫性疾病。

  1.2  儀器、試劑

  1.2.1  儀器 

  電泳儀(北京市六一儀器廠DYY?7B型),熒光顯微鏡 (日本 尼康E800),低溫冰箱(青島海爾),離心機(安徽科大創新有限公司中佳分公司KDC?1042),凝膠成像系統(德國 Herolab UVT?28),彗星圖像分析系統(捷克LUCIATMCOMET),酶標儀(美國寶特ELX?800)。

  1.2.2  試劑 

  Percoll分離液(美國Ameisco公司),兔抗人Ⅷ因子相關抗原、FITC標記的羊抗兔IgG熒光抗體(美國ADI公司),正常熔點瓊脂糖、低熔點瓊脂糖、月桂?;“彼崮?、TritonX?100、Thris?HCl(美國Ameisco公司),Na2?EDTA、二甲基亞砜、溴化乙錠、胎盼藍(西安華美公司),vWF(上海太陽生物科技有限公司),PLGF ELISA試劑盒(美國R&D公司)。

  1.3  方法
   
  用含0.109 mol/L的枸櫞酸鈉的負壓管采集AMI患者發病24h內和正常對照組空腹血液各10mL,立即顛倒混勻,分離血漿和CEC備用。

  1.3.1  CEC提取鑒定 

  取新鮮枸櫞酸鈉抗凝血10mL用 percoll密度離心法分離CEC;以Ⅷ因子相關抗原鑒定所提細胞為CEC;用RPMI1640調細胞濃度為1×106?L?1,在光鏡下用臺盼藍法檢測活細胞率在95%以上,細胞懸液備用。

  1.3.2  單細胞凝膠電泳[3] 

  45℃下將150μL 10g/L 的正常熔點瓊脂糖涂在磨砂載玻片上, 加蓋玻片輕壓,于4℃凝固10min制成第一層膠;37℃下將150μL含1000個細胞的懸液與等體積5g/L低熔點瓊脂糖混合均勻,取150μL滴在第一層膠上,加蓋玻片輕壓,于4℃凝固10min制成第二層膠;37℃下取5g/L低熔點瓊脂糖100μL涂在第二層膠上并加蓋玻片輕壓,于4℃凝固10min制成第三層膠。小心去掉蓋玻片,將包埋了細胞的載玻片小心放入細胞裂解液中,置于4℃ 1.5h。取出載玻片,緊密排列于水平電泳槽中,加入電泳緩沖液,4℃解旋20min。在電壓32V,電流 300mA,4℃電泳25min。電泳后小心將載玻片浸于中和液 15min兩次。以20μg/ mL 溴乙錠染色20min,加蓋玻片。在熒光顯微鏡下進行觀察、照相。

  1.3.3  圖像分析 

  在熒光顯微鏡(400倍)下觀察,每片計數100個細胞,用彗星圖像分析系統進行分析細胞彗星率和彗尾DNA百分含量。

  1.3.4  vWF、PLGF檢測 

  嚴格按照試劑盒進行檢測。

  1.4  統計學處理
    
  所得數據用SPSS11.5分析,數據以均數±標準差(±s)表示,采用student t?檢驗,以P<0.05為差異有統計學意義。

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